Serratia marcescens果糖

发帖时间:2019-05-12 15:51

摘要目的确定粘质沙雷氏菌的两种FBCase是否同时催化果糖-1,6-二磷酸(F-1,6-BP)和庚二酮-1,7-二磷酸(S-1,7-BP功能)
[方法]PCR构建pET28a-Sm-FBPase和pET28a-Sm-GlpX,诱导IPTG在大肠杆菌中表达,用镍柱纯化目的蛋白。
Sm-FBPase和Sm-GlpX的酶促分析体外酶学分析
[结果]SDS-PAGE结果显示,Sm-FBPase和Sm-GlpX的分子量分别为45 kDa和38 kDa。
体外酶分析显示两种酶均催化F-1,6-BP和S-1,7-BP。
Sm-GlpX是依赖于Mn 2+或Mg 2+的酶,并且Sm-FBPase的活化需要Mn 2+。
根据被测试的底物,Sm-FBPase的最佳pH值为7。
0?7
5,40°C的最佳温度。Sm-GlpX最适pH8。
0,最佳温度为40-45°C。
当F-1,6-BP用作底物时,Sm-FBPase和Sm-GlpX的Kcat / Km分别为6。
88,7
55S ^ -1 mmol ^ -1L。
然而,当使用S-1,7-BP作为底物时,Sm-FBPase和Sm-GlpX的Kcat / Km分别为3。
17,8
54S ^ -1 mmol ^ -1L。
[结论]Sm-FBPase和Sm-GlpX可以催化F-1,6-BP和S-1,7-BP的吸附,Sm-GlpX催化S-1,7-BP的效率。到。FBP酶。
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